產(chǎn)品展示PRODUCTS
cPM小鼠模型構(gòu)建
更新時(shí)間：2025-06-26
訪問(wèn)量：74
廠商性質(zhì)：其他
1. cPM小鼠模型構(gòu)建策略選擇
A. 心臟特異性啟動(dòng)子選擇
常用啟動(dòng)子：
αMHC（Myh6）：成年心肌細(xì)胞特異性表達(dá)（胚胎期低表達(dá)）。
ct*T（Tnnt2）：胚胎期和成年期均高表達(dá)。
Nppa（ANF）：心力衰竭時(shí)激活，可用于病理模型。
B. 基因操作方式
過(guò)表達(dá)模型：將目標(biāo)基因與心臟啟動(dòng)子連接（如AAV9載體或轉(zhuǎn)基因小鼠）。
條件性敲除（cKO）：需結(jié)合Cre-loxP系統(tǒng)（如αMHC-Cre × floxed基因小鼠）。
條件性激活（如GOI）：利用Tet-on/off系統(tǒng)或Cre依賴的激活工具。
2.cPM小鼠模型構(gòu)建 技術(shù)流程
A. 載體構(gòu)建
克隆心臟啟動(dòng)子（如αMHC 5.5 kb片段）。
插入目標(biāo)基因（或sgRNA用于CRISPR編輯）。
添加報(bào)告基因（如GFP或LacZ）便于表型驗(yàn)證。
B. 小鼠品系生成
轉(zhuǎn)基因小鼠：顯微注射載體至受精卵原核。
基因敲除/敲入：CRISPR-Cas9或ES細(xì)胞打靶。
條件性模型：需先獲得floxed小鼠（loxP位點(diǎn) flanking 目標(biāo)基因），再與心臟特異性Cre小鼠交配。
C. 品系驗(yàn)證
基因型鑒定：PCR或測(cè)序確認(rèn)目標(biāo)基因整合。
表達(dá)驗(yàn)證：qRT-PCR/Western blot檢測(cè)心臟特異性表達(dá)。
功能評(píng)估：超聲心動(dòng)圖（Echo）、心電圖（ECG）、組織病理學(xué)（如Masson染色檢測(cè)纖維化）。
3. 常見(jiàn)問(wèn)題與優(yōu)化
A. 非特異性表達(dá)
解決：驗(yàn)證啟動(dòng)子特異性（如分離肝、腦、骨骼肌組織排除泄漏表達(dá)）。
優(yōu)化：使用更嚴(yán)格的啟動(dòng)子（如ct**比αMHC胚胎期表達(dá)更強(qiáng)）。
B. Cre毒性
αMHC-Cre：高表達(dá)可能導(dǎo)致心肌肥厚（需選擇低表達(dá)品系，如MerCreMer）。
誘導(dǎo)型Cre（如他莫xi芬誘導(dǎo)的Cre-ERT2）可避免發(fā)育期影響。
C. 表型異質(zhì)性
解決：維持遺傳背景一致（如回交至C57BL/6J 10代以上）。
4. 應(yīng)用示例
cPM過(guò)表達(dá)模型：
目標(biāo)：研究心肌肥厚（如過(guò)表達(dá)calcineurin）。
方法：αMHC啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)calcineurin轉(zhuǎn)基因小鼠。
cPM敲除模型：
目標(biāo)：研究心臟代謝（如PPARα敲除）。
方法：αMHC-Cre × PPARα-floxed小鼠。
5. 注意事項(xiàng)
倫理審批：確保實(shí)驗(yàn)符合動(dòng)物福利規(guī)范（如3R原則）。
對(duì)照設(shè)計(jì)：同窩野生型（WT）和雜合子（HET）對(duì)照。
表型分析時(shí)間點(diǎn)：根據(jù)目標(biāo)疾?。ㄈ缧牧λソ吣Ｐ托栝L(zhǎng)期隨訪）。
